安全性数据

实施机构：Nakhodka号海洋油污染生物修复研究会

将各组10尾蓝绿光鳃鱼（平均体长约3cm、体重约1g）置于20升人工海水中，在28℃、每天投饵3次（早、中、晚）的条件下饲养观察7天。试验组的饲养水中添加该微生物制剂，使其浓度达到0.1%。（微生物制剂添加试验）

饲养试验结果表明，未观察到对蓝绿光鳃鱼的急性毒性。

实施机构：加拿大环境部

将虹鳟（平均体长约30mm、体重约0.25g）置于10升脱氯自来水中，在15℃下饲养4天。试验组的饲养水中添加该微生物制剂，使其浓度达到0.1%（10,000 mg/L）。（微生物制剂添加试验）。饲养试验结果表明，该微生物的LC50^*3)为 >10,000 mg/L。由此可见，未观察到该微生物对虹鳟的急性毒性。

参考：表面活性剂（LAS直链烷基苯磺酸盐；常用的表面活性剂）对虹鳟的LC50＝4.7mg/L。

实施机构：Nakhodka号海洋油污染生物修复研究会

将各组20尾香鱼幼鱼（平均体长约8cm、体重约5g）置于100升淡水（地下水）中，在19～20℃、每天投饵3次（早、中、晚）的条件下饲养观察7天。试验组的饵料中添加该微生物制剂，使其浓度达到0.1%。（微生物制剂投喂试验）

饲养试验结果表明，未观察到对香鱼幼鱼的急性毒性。

实施机构：Nakhodka号海洋油污染生物修复研究会

将各组20尾香鱼幼鱼（平均体长约8cm、体重约5g）置于80升淡水（地下水）中，在19～20℃、每天投饵3次（早、中、晚）的条件下饲养观察30天。试验组的饵料中添加该微生物制剂，使其浓度达到0.1%。（微生物制剂投喂试验）

饲养试验结果表明，对照组与试验组均观察到香鱼死亡，但试验组的死亡数较少，且从死亡香鱼的解剖结果来看也完全未发现异常。由于香鱼的死亡集中在试验开始后的一周内，故推测死亡原因可能是饲养环境变化导致的应激性死亡。因此，判定未观察到该微生物制剂对香鱼幼鱼的亚急性毒性。

实施机构：加拿大环境部

将水蚤置于200毫升脱氯自来水中，在20℃下饲养2天。试验组的饲养水中添加该微生物制剂，使其浓度达到0.1%（10,000 mg/L）。（微生物制剂添加试验）。饲养试验结果表明，该微生物的LC50^*3)为 >10,000 mg/L。由此可见，未观察到该微生物对水蚤的急性毒性。

实施机构：Nakhodka号海洋油污染生物修复研究会

为确认该微生物制剂对生物的影响，进行了海胆卵（喇叭海胆，Toxopneusts pileolus）的受精实验。此类受精实验在加拿大环境部及美国环境保护署被用作海水的生物检定法。此外，为作比较，还使用油处理剂及家用中性洗涤剂进行了实验。

将微生物制剂、油处理剂及家用中性洗涤剂添加至海水中，设定为0ppm（对照）、1ppm、5ppm、10ppm、50ppm、100ppm。在这些溶液中进行受精实验，于显微镜下观察、计测100个卵的受精膜形成情况，将重复4次的平均值作为海胆卵的受精率数据。

实验结果表明，微生物制剂、油处理剂、家用中性洗涤剂均随海水中浓度升高而使海胆卵的受精率下降。然而，影响程度差异很大，在100ppm时，油处理剂的受精率为4%、家用中性洗涤剂为0%，显著抑制受精，而微生物制剂为68%，影响较小。因此，与油处理剂、家用中性洗涤剂相比，判定该微生物制剂的影响较小。

引用；Bioremediation on the shore after an oil spill from the Nakhodka in the Sea of Japan, II. Toxicity of a bioremediation agent with microbiological cultures in aquatic organisms, Marine Pollution Bulletin 40 308-324(2000)

实施机构：美利坚合众国环境保护署

在墨西哥湾Mega Borg号油泄漏事故中，使用奥本海默配方进行了基于生物修复的净化处理。利用该现场样本水，进行了该微生物制剂对糠虾（Misidopsis bahia）及银汉鱼（amenidia beryllina）的毒性试验。

向对照、生物修复处理前、生物修复处理后三种样本水中添加不同浓度的该微生物制剂，进行糠虾及银汉鱼的饲养试验。结果表明，在96小时的饲养实验中，无论哪一系列、哪一种微生物制剂添加浓度，均未测得糠虾、银汉鱼的LC50。本实验中虽观察到糠虾及银汉鱼有少量死亡，但与添加微生物浓度无相关性。此外，对照组糠虾、银汉鱼的存活状况极为良好，确认了供试验用的生物处于适合试验的状态。综上所述，未观察到该微生物制剂对糠虾及银汉鱼的毒性。

引用；美利坚合众国环境保护署、环境调查研究所（1990年7月）

实施机构：得克萨斯大学海洋研究所

以轮虫（Brachionus plicatilis）作为测试生物，在美国得克萨斯大学海洋研究所测试了该微生物（以下称配方）对轮虫的影响。

试验方法：
（1）无菌系（无其他微生物的状态）下的试验
将轮虫在0.5％的次氯酸钠中浸泡3分钟进行灭菌处理后，用无菌生理盐水培养，制备无菌轮虫。将该轮虫接种于无菌海水中（最终浓度5只/ml），并向其中添加配方（最终浓度0.01mg/ml）。作为对照，准备将无菌轮虫（最终浓度5只/ml）接种于非灭菌海水中的样品。配方添加组、对照组均各做4个平行进行试验。培养4天，就轮虫的增加量（P）和增殖速率（GR），对配方添加组与对照组进行比较。P及GR按以下计算式算出，并使用统计程序（ANOVA）对添加组·对照组两者的显著性差异进行检验。P =（最终浓度－初始浓度）/培养天数（4天）GR =（ln最终浓度－ln初始浓度）/培养天数（4天）

（2）开放系（有其他微生物的状态）下的试验
向经过滤膜过滤（孔径1.2μm）的海水中接种轮虫，并添加配方（最终浓度0.01mg/ml）。同时准备对照（不添加配方），各培养4天后，与无菌系试验同样，比较两者轮虫的增加量（P）及增殖速率（GR）。试验做2个平行，各自轮虫的初始浓度分别为30只/ml和17只/ml。

结果：
无论无菌系还是开放系试验，就轮虫的增殖量及增殖速率而言，配方添加组与对照组之间均未观察到显著差异。因此，判定配方对轮虫增殖无影响。

实施机构：环境厅企画调整局环境研究技术课

就该微生物制剂对藻类（Skeletonema costatum）的增殖抑制试验，按以下要领进行。

试验方法：
向各个添加了原油（原油：海水＝1：9）的试验组中，按各浓度设定添加微生物制剂（但海水组及含油对照组除外），并向其中接种藻类，使初始浓度达到10,000～20,000细胞/ml，培养7天。下面给出藻类的增殖曲线（叶绿素a）。

结果：
由于海水组呈现标准的藻类增殖曲线，证明试验所用藻类没有问题。含油对照组与制剂添加组中藻类的增殖曲线未观察到显著差异。证明本制剂在加入油（原油）的情况下，其毒性与仅有油的情况相比为同等或更低。即使在溶解极限的最大浓度下，也未见硅藻的增殖抑制，作为毒性指标的EC50值高于测定极限。

环境厅企画调整局环境研究技术课：海岸流出油生物修复利用指针研究（海岸油污染生物修复利用指针制定研究会、利用生物的环境修复等安全性评价方法等研究调查，及流出油处理的生物修复适用案例研究等研究调查）〈平成10～12年度〉中实施。